介紹
紅酒中單寧，鐵反應(yīng)性酚類，花青素和聚合物色素的測定是葡萄酒行業(yè)質(zhì)量控制的重要組成部分。準(zhǔn)確、可靠地測量葡萄酒中的酚類化合物對于發(fā)酵，浸漬，壓榨和混合過程中的決策至關(guān)重要。Harbertson等人于 2003 年開發(fā)了一種全面的紅酒酚類測定法 (1)。傳統(tǒng)上，該測定法是使用基于比色皿的紫外可見分光光度計進(jìn)行的。讀取單個比色皿中的單個樣品，記錄結(jié)果并分析數(shù)據(jù)是一個耗時且費(fèi)力的過程 。Heredia 等人認(rèn)為需要一種快速、經(jīng)濟(jì)有效的檢測方法，因此將該檢測方法應(yīng)用于微孔板平臺。這種方法增加了有關(guān)人工，時間和樣品量的通量，擴(kuò)大了中等規(guī)模酒廠中監(jiān)測酚類化合物提取發(fā)酵過程的能力。在這里，我們描述了使用 MolecularDevices 公司的 SpectraMaxPlus 384 微孔板讀板機(jī)和 SoftMaxPro 軟件來有效收集和分析此測定的數(shù)據(jù)。SpectraMax Plus 384 微孔板讀板機(jī)的一些獨(dú)特功能包括：
? 波長范圍：190?1000 nm，以 1 nm 為增量
? 基于雙單色器的光學(xué)元件使其無需使用濾光片 ( 圖 1 )
? 讀取速度：96 孔：5 秒384 孔：16 秒
? 溫度：比環(huán)境溫度高 4 °C 至 45 °C
? 比色皿插槽：可容納標(biāo)準(zhǔn)比色皿和 12 x75 mm 試管
? OD 范圍：0?4 OD

紅酒酚含量測定
Adams / Harbertson 測定法使用分光光度法、蛋白質(zhì)沉淀法和亞硫酸氫鹽漂白技術(shù)來測量紅酒中的酚類。

PathCheck傳感器
PathCheck 傳感器是 可以測量微孔板中樣品的光程。 這是將微孔板中的吸光度讀數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化為 1 厘米比色皿的創(chuàng)新方法。
Beer-Lambert定律指出吸光度 = E * C * L 其中
E = 吸收率 ( 消光系數(shù) )
C = 濃度
L = 光程
在比色皿的情況下，光路是水平的。因此，光程是固定的，等于 1 cm。但是在微孔板的情況下，光路是垂直的。因此，光程長短取決于樣品的體積 ( 圖 2 )。 PathCheck傳感器會糾正差異。
SoftMax Pro 軟件
該軟件控制儀器，收集數(shù)據(jù)并提供完整的數(shù)據(jù)分析。 帶有適當(dāng)?shù)膬x器設(shè)置和計算方法的客制化模板可以預(yù)先編寫并保存。 Z終用戶可以方便地打開預(yù)先設(shè)置的模板，獲得完整的結(jié)果和分析，而無需重新花費(fèi)時間設(shè)置模板。

優(yōu)勢
? 與傳統(tǒng)的比色皿方法相比，提高了通量
? 使用 SoftMax Pro 軟件進(jìn)行自動數(shù)據(jù)分析
? PathCheck 傳感器用于微孔板孔中的吸光度讀數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化

實驗材料
? 葡萄酒樣品: Pinot noir (Sonoma Coast)
? 馬來酸(Fisher Scientific cat. #03417-500)
? 牛血清白蛋白 (Sigma cat. #A3803-10G)
? 三乙醇胺 (Sigma cat.#T1377-100 mL)
? Ferric chloride hexahydrate(Sigma cat.#236489-100G)
? (+)- 兒茶素 (Sigma cat. #C1251-5G)
? 乙酸 (Sigma cat. #242853-2.5KG)
? 氯化鈉 (Fisher Scientific cat. #S271-3)
? 氫氧化鈉(Fisher Scientific cat. #S318-500)
? 乙醇 (Acros cat. #61509-0040)
? 酒石酸氫鉀 (Sigma cat. #243531- 500G)
儀器及配件
? SpectraMax Plus 384 微孔板讀板機(jī)(Molecular Devices cat. #PLUS 384)
? 紫外可透 96 孔微孔板(Costar cat. #3635)
? 微量移液器(Drummond Scientific cat. #2704174,2705402, 2705412, 2704180; Drummond Digital Microdispenser cat.#3-000-510)
? 微量移液器的微量吸頭(Eppendorf cat. #epT.I.P.S.; Reloadscat. #022491539, 022491512, 022491547)
? 微量離心管離心機(jī)(Eppendorf cat. #5424)
? 1.5 mL 微量離心管(Eppendorf cat. #022364111, 022363557,022363514, 2236357-3)
實驗方法
兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線
在微孔板中進(jìn)行一系列稀釋 ， 以 包 括0-300 mg/L 兒茶素，每個濃度兩個復(fù)孔。用緩沖液 C 將Z終體積調(diào)節(jié)至 262 μL。將板在振蕩器上振蕩，并向每個孔中加入38 μL 氯化鐵溶液。將板進(jìn)行震蕩，進(jìn)一步孵育 10 分鐘，并在酶標(biāo)儀中于 510 nm讀取吸光度。 緩沖液 C 用作空白。