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儀器網(wǎng)/ 應(yīng)用方案/ GB 5009.263-2016 食品中阿斯巴甜和阿力甜的測(cè)定 解決方案

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當(dāng)前,食品中阿斯巴甜致癌性問(wèn)題受到廣泛關(guān)注,成為國(guó)際熱點(diǎn)新聞之一。近日其評(píng)估結(jié)果已經(jīng)正式發(fā)布,國(guó)家食品安全評(píng)估中心聯(lián)合國(guó)家癌癥中心對(duì)評(píng)估結(jié)果做了解釋說(shuō)明。小編今天再為大家梳理下有關(guān)阿斯巴甜的知識(shí)點(diǎn)。


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問(wèn)

一、阿斯巴甜是什么?

      阿斯巴甜化學(xué)名稱(chēng)為天門(mén)冬酰苯 丙胺酸甲酯,作為一種Z常見(jiàn)的人工代糖甜味劑,自20世紀(jì)80年代以來(lái)廣泛用于各種食品和飲料產(chǎn)品中,是國(guó)際食品法典委員會(huì)(CAC)及多個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)合法使用的食品添加劑。根據(jù)我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)《GB 2760-2014 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》,阿斯巴甜作為甜味劑可以用于面包、糕點(diǎn)、餅干、飲料、調(diào)味品等食品中。同時(shí),阿斯巴甜作為相對(duì)低端的人工甜味劑,食品行業(yè)內(nèi)的眾多企業(yè)已經(jīng)逐步使用安全風(fēng)險(xiǎn)更小的天然甜味劑取代人工甜味劑。


問(wèn)

二、阿斯巴甜是否致癌?

      2023年5月,世界衛(wèi)生組織(WHO)發(fā)布的非糖甜味劑指南中便建議避免食用安賽蜜、阿斯巴甜、糖精、三氯蔗糖、甜菊糖等非糖甜味劑。7月14日,WHO下屬跨政府機(jī)構(gòu)國(guó)際癌癥研究中心(IARC)在世衛(wèi)官網(wǎng)正式公布了一項(xiàng)關(guān)于阿斯巴甜的Z 新健康評(píng)估結(jié)果,報(bào)告中稱(chēng)基于阿斯巴甜具有人類(lèi)致癌性的“有限證據(jù)”,將阿斯巴甜歸類(lèi)為IARC 2B類(lèi)致癌物。具體來(lái)說(shuō),雖然有研究表明攝入阿斯巴甜可能和罹患肝細(xì)胞癌有關(guān),但是在對(duì)人類(lèi)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物癌癥及致癌機(jī)制方面均沒(méi)有令人信服的證據(jù),以佐證阿斯巴甜與人類(lèi)癌癥之間存在確切的相關(guān)性。

      致癌物質(zhì)的致癌風(fēng)險(xiǎn)通常由兩個(gè)因素決定。其一是致癌能力,IARC主要依據(jù)人類(lèi)流行病學(xué)調(diào)查和病例報(bào)告、動(dòng)物試驗(yàn)和生物學(xué)機(jī)制研究等,將致癌證據(jù)強(qiáng)度分為1類(lèi),2A、2B類(lèi)和3類(lèi)(其中1類(lèi)具有人類(lèi)致癌性,2A類(lèi)對(duì)人類(lèi)很可能致癌、2B類(lèi)對(duì)人類(lèi)可能致癌但缺乏充分科學(xué)證據(jù),3類(lèi)為尚無(wú)法分類(lèi));另一因素是暴露水平,指人體實(shí)際攝入或接觸該有害物質(zhì)量的多少。IARC將阿斯巴甜列為2B類(lèi)可能致癌物,說(shuō)明其對(duì)人類(lèi)致癌性的科學(xué)證據(jù)尚不充分,需進(jìn)一步研究考證。通過(guò)對(duì)其用量進(jìn)行控制管理,能夠保障其使用的安全性。


問(wèn)

三、阿斯巴甜的可接受每日攝入量是多少?

答 

       食品添加劑聯(lián)合專(zhuān)家委員會(huì)(JECFA)稱(chēng)“維持阿斯巴甜原風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)論,按照目前劑量和范圍使用,不會(huì)對(duì)消費(fèi)者產(chǎn)生健康危害”。評(píng)估報(bào)告中重申了阿斯巴甜每日每公斤體重40毫克的可接受每日攝入量,一個(gè)人每天的阿斯巴甜消費(fèi)量在這個(gè)限度內(nèi)是安全的。

       我國(guó)國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心結(jié)合此項(xiàng)Z 新評(píng)估結(jié)果和我國(guó)居民消費(fèi)情況進(jìn)行安全性評(píng)估表明,阿斯巴甜按照我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范使用可以保障安全。國(guó)標(biāo)《GB 2760-2014 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定可樂(lè)型碳酸飲料中阿斯巴甜的限值是0.6g/kg,我們按照限值標(biāo)準(zhǔn)的Z 高含量計(jì)算,一個(gè)體重50公斤的成年人,粗略估算每天飲用7瓶500mL的無(wú)糖可樂(lè)會(huì)超過(guò)安全攝入量,需要注意下這個(gè)推算只是粗略估算,我們?nèi)粘I钪谐藷o(wú)糖可樂(lè)還有很多食品含有阿斯巴甜。但總體而言,大家只要做到合理膳食,健康飲食,便可不必過(guò)分擔(dān)心。


問(wèn)

四、食品中阿斯巴甜如何檢測(cè)?

       安譜實(shí)驗(yàn)積極關(guān)注食品安全問(wèn)題,參照《GB 5009.263-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中阿斯巴甜和阿力甜的測(cè)定》檢測(cè)方法,使用Athena C18 液相色譜柱,對(duì)無(wú)糖可樂(lè)(可樂(lè)型碳酸飲料)、乳酸飲品(含乳飲料)、果凍(果凍類(lèi))、話(huà)梅(蜜餞類(lèi))、薯片(膨化食品)和口香糖(膠基糖果)的六種不同類(lèi)型食品基質(zhì)中阿斯巴甜和阿力甜含量進(jìn)行檢測(cè),外標(biāo)法進(jìn)行定量,結(jié)果表明此方法操作簡(jiǎn)便,回收率高,符合檢測(cè)要求。


食品中阿斯巴甜和阿力甜

檢測(cè)的完整解決方案如下

1、標(biāo)準(zhǔn)溶液配置


1.1 標(biāo)準(zhǔn)品

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1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):

      阿斯巴甜和阿力甜混合標(biāo)準(zhǔn)工作液系列的制備:將阿斯巴甜和阿力甜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用水逐級(jí)稀釋成混合標(biāo)準(zhǔn)系列,阿斯巴甜和阿力甜的濃度均分別為100 μg/mL、50 μg/mL、25 μg/mL、10.0 μg/mL、5.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液系列。置于4℃左右的冰箱保存,有效期為30 d。


項(xiàng)

① 標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍為5-100 μg/mL,實(shí)際樣品檢測(cè)時(shí)可能某些樣品含量偏低,不在線(xiàn)性范圍內(nèi),建議可以根據(jù)樣品含量改變標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的濃度,以保證樣品含量結(jié)果在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的范圍內(nèi)。


2、前處理操作

2.1 樣品前處理

       無(wú)糖可樂(lè)(可樂(lè)型碳酸飲料):稱(chēng)取約5 g(精確到0.001 g)碳酸飲料試樣于50 mL燒杯中,在50℃水浴上除去二氧化碳,然后將試樣全部轉(zhuǎn)入25 mL容量瓶中,用水定容,混勻,4000 r/min離心5 min,上清液經(jīng)0.45 μm PTFE針式濾器過(guò)濾后用于色譜分析。

        乳酸飲品(含乳飲料):分別稱(chēng)取約5 g試樣(精確到0.001g)于50 mL離心管,加入10 mL乙醇,蓋上蓋子,首先輕輕上下顛倒離心管5次(不能振搖),然后靜置1 min,4000 r/min離心5 min,上清液濾入25 mL容量瓶,沉淀用8 mL乙醇-水(2:1)洗滌,離心后上清液轉(zhuǎn)移入同一25 mL容量瓶,用乙醇-水(2:1)定容,經(jīng)0.45 μm PTFE針式濾器過(guò)濾后用于色譜分析。

       果凍(果凍類(lèi)):用玻棒攪勻后稱(chēng)取約5 g(精確到0.001g)制備均勻的果凍試樣于50 mL的比色管中,加入25 mL 80%的甲醇水溶液,在70 ℃的水浴上加熱10 min,取出比色管,趁熱將提取液轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶,再用15 mL 80%的甲醇水溶液分兩次清洗比色管,并每次振搖約10 s,并轉(zhuǎn)入同一個(gè)50 mL的容量瓶,冷卻至室溫,用80%的甲醇水溶液定容到刻度,混勻,4000 r/min離心5 min,將上清液經(jīng)0.45 μm PTFE針式濾器過(guò)濾后用于色譜分析。

       話(huà)梅(蜜餞類(lèi)):用食品加工機(jī)按試樣與水的質(zhì)量比為1:2進(jìn)行勻漿,稱(chēng)取約3 g(精確到0.001g)勻漿試樣于25 mL的離心管中,然后向離心管加入10 mL 60%的甲醇水溶液,搖勻,超聲10 min,4000 r/min離心5 min,上清液轉(zhuǎn)入25 mL容量瓶,再加10 mL 50%的甲醇水溶液重復(fù)操作一次,上清液轉(zhuǎn)入同一個(gè)25 mL容量瓶,Z 后用50%的甲醇水溶液定容,經(jīng)0.45 μm PTFE針式濾器過(guò)濾后用于色譜分析。

       薯片(膨化食品):試樣需要用食品加工機(jī)進(jìn)行均勻粉碎,稱(chēng)取5 g(精確到0.001g)粉碎試樣于50 mL離心管中,加入12 mL 50%甲醇水溶液,渦旋混勻,超聲振蕩提取10 min,4000 r/min離心5 min,上清液轉(zhuǎn)移入25 mL容量瓶中,再加10 mL 50%甲醇水溶液,渦旋混勻,超聲振蕩提取5 min,4000 r/min離心5 min,上清液轉(zhuǎn)入同一25 mL容量瓶中,用蒸餾水定容,經(jīng)0.45 μm PTFE針式濾器過(guò)濾后用于色譜分析。

       口香糖(膠基糖果):用剪刀將膠基糖果剪成細(xì)條狀,稱(chēng)取約3 g(精確到0.001g)剪細(xì)的膠基糖果試樣,轉(zhuǎn)入100 mL的分液漏斗中,加入25 mL水劇烈振搖約1 min,再加入30 mL 正己烷,繼續(xù)振搖直至口香糖全部溶解(約5 min),靜置分層約5 min,取下層水相4,000 r/min離心3min后,取水相放入50 mL容量瓶,然后加入10 mL水到分液漏斗,輕輕振搖約10 s,靜置分層約1 min,再將下層水相放入同一容量瓶中,再加入10 mL水重復(fù)1次操作,Z 后用水定容至刻度,搖勻后稀釋十倍,過(guò)0.45 μm PTFE針式濾器過(guò)濾后用于色譜分析。


項(xiàng)

① 實(shí)際樣品檢測(cè)過(guò)程中,如樣品含量偏低,可進(jìn)行稱(chēng)樣量的增加或定容體積的減?。蝗鐦悠泛科?,可進(jìn)行稱(chēng)樣量的減小或定容體積的增加。

② 本實(shí)驗(yàn)中,薯片樣品進(jìn)行了稱(chēng)樣量的增加,口香糖樣品進(jìn)行定容液的稀釋?zhuān)詽M(mǎn)足方法適用性。

③ 檢測(cè)前需確認(rèn)液相色譜柱的柱效情況,以避免由柱效原因?qū)е碌墓矸濉⒎迤坪头逍尾畹葐?wèn)題,從而干擾目標(biāo)物識(shí)別,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

④ 建議每批樣品檢測(cè)均需進(jìn)行方法空白檢測(cè),驗(yàn)證是否有本底影響。

⑤ 當(dāng)待測(cè)基質(zhì)樣品中雜質(zhì)較多(如蜜餞類(lèi))時(shí),在滿(mǎn)足要求下,建議可將待檢樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行色譜分析。

⑥ 膠基糖果基質(zhì)中可能存在特別添加的“薄荷因子”等無(wú)法完全溶解部分,故在實(shí)際實(shí)驗(yàn)開(kāi)展中需對(duì)提取溶液進(jìn)行離心去除不溶物后,取上層水相定容進(jìn)行分析檢測(cè)。


3、儀器條件

3.1 液相色譜:

a) Athena C18 液相色譜柱(4.6 mm*250 mm,5.0 μm,貨號(hào):LAEQ-462571);

b)柱溫:30℃

c)流速:0.80 mL/min

d)進(jìn)樣量:20 μL;

f)流動(dòng)相:乙腈-水(20:80)/甲醇-水(40:60);

g)紫外檢測(cè)波長(zhǎng):200 nm。


4、實(shí)驗(yàn)譜圖

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圖4-1 不同流動(dòng)相下混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(10.0 μg/mL)譜圖


注:左邊譜圖流動(dòng)相為乙腈-水(20:80),右邊譜圖流動(dòng)相為甲醇-水(40:60)


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圖4-2 六種基質(zhì)樣品本底檢測(cè)實(shí)驗(yàn)譜圖



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圖4-3 六種基質(zhì)樣品加標(biāo)實(shí)驗(yàn)譜圖


5、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):

image.png


5.2 基質(zhì)空白數(shù)據(jù):


表5-1  六種基質(zhì)樣品本底檢測(cè)結(jié)果

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注:“N.D”表示未檢出,蜜餞類(lèi)樣品的方法定量限為0.015 g/kg;“/”表示無(wú)對(duì)應(yīng)限值。


5.3 加標(biāo)回收率數(shù)據(jù):

表5-2  六種基質(zhì)樣品加標(biāo)實(shí)驗(yàn)回收率

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注:樣品加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)中因樣品本底含量等原因采用了降低稱(chēng)樣量或改變定容體積等操作。


6、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

安譜實(shí)驗(yàn)采用《GB 5009.263-2016食品中阿斯巴甜和阿力甜的測(cè)定》,通過(guò)液相色譜系統(tǒng)檢測(cè)食品中阿斯巴甜和阿力甜添加量情況。外標(biāo)法測(cè)試阿斯巴甜和阿力甜在0.1 μg/mL-100 μg/mL濃度范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性方程R2 > 0.999,線(xiàn)性良好。在六種不同類(lèi)型基質(zhì)中均未檢測(cè)到阿力甜,除蜜餞類(lèi)樣品外五種基質(zhì)中均檢測(cè)到不同含量的阿斯巴甜,但均滿(mǎn)足《GB 2760-2014 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》在品種使用范圍內(nèi)的使用量要求。針對(duì)不同基質(zhì)在樣品適當(dāng)加標(biāo)水平下,阿斯巴甜和阿力甜的加標(biāo)回收率均在80%-110%范圍之間,滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)要求。


7、產(chǎn)品信息

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