腎上腺素（E）、去甲腎上腺素（NE）和多巴胺（DA）均屬于兒茶酚胺類(lèi)物質(zhì)，對(duì)人體起著重要的作用。同時(shí)，變腎上腺素（MN）、去甲變腎上腺素（NMN）和3-甲氧基酪胺（3-MT）作為它們的代謝產(chǎn)物，亦與人體的健康和疾病密切相關(guān)。因此，臨床研究者通常都很關(guān)注血漿中兒茶酚胺及其代謝物的測(cè)定。

安譜實(shí)驗(yàn)對(duì)人血漿基質(zhì)進(jìn)行加標(biāo)，并使用 E-Gen WCX 96孔板（SBVD-CF000801）針對(duì)上述 6 種兒茶酚胺及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行富集凈化，再用兒茶酚胺專用柱色譜分離，Z 后進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)前處理方法步驟簡(jiǎn)單，耗時(shí)較短，能獲得較好的回收率。

一、實(shí)驗(yàn)方法

01、前處理操作

前處理

采用50 mM乙酸銨溶液按照1:1比例稀釋加標(biāo)血漿，混合后，待上樣

活化平衡

200 μL甲醇，200 μL水

上樣

稀釋后的血漿250 μL全部上樣

淋洗1

200μL 25mM乙酸銨水溶液

淋洗2

200 μL乙腈-異丙醇（1：1），

淋洗完成后，正壓約30s，將溶劑壓干

洗脫

2×75 μL含有2%甲酸的乙腈/水（85/15，V/V），待重力流出，合并收集，洗脫完成后正壓約30s，將洗脫液全部壓至96孔收集板

氮吹復(fù)溶 

常溫下溫和氮吹至近干，用125 μL 0.1%甲酸水溶液復(fù)溶，渦旋后離心，待進(jìn)樣LC/MS/MS

96 孔正壓固相萃取裝置

備注：

a、上樣、淋洗時(shí)注意控制流速約2-3s/滴；

b、氮吹時(shí)間30min左右；

c、國(guó)產(chǎn)D品牌 （3 mg）和進(jìn)口W品牌（2 mg）也按照以上方法進(jìn)行測(cè)試。

02、儀器條件

PerkinElmer三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(質(zhì)譜：QSight 220;液相：QSight LX50)

二、實(shí)驗(yàn)譜圖

圖1. (A) 320 pg/mL 的兒茶酚胺及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)品、(B)200 pg/mL 的人血漿樣品加標(biāo)經(jīng)E-Gen WCX 96孔板SPE純化富集后檢測(cè)的色譜圖。

三、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

表3 兒茶酚胺及其代謝物在人血漿基質(zhì)中200 pg/mL加標(biāo)濃度時(shí)的回收率

表4 采用微孔板從人血漿中提取兒茶酚胺及其代謝物的基質(zhì)效應(yīng)

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)使用E-Gen WCX 96孔板和兒茶酚胺專用柱對(duì)人血漿中兒茶酚胺及其代謝物進(jìn)行提取和分析。E-Gen WCX 96孔板在活化、平衡過(guò)程中的流速明顯快于某進(jìn)口品牌W，且E-Gen WCX 96孔板的回收率良好，基質(zhì)效應(yīng)較低。

因此，可以得出E-Gen WCX 96孔板在測(cè)試血漿中兒茶酚胺及其代謝物的實(shí)驗(yàn)中可以保證良好的回收率和穩(wěn)定性，同時(shí)基質(zhì)效應(yīng)較低，可與進(jìn)口品牌對(duì)標(biāo)。

五、產(chǎn)品推薦