【概述】

        諸如農(nóng)藥殘留等的食品安全問題已經(jīng)成為世界上各個國家的研究熱點。許多國家和國際性組織對農(nóng)藥的殘留限量(MRLs)進(jìn)行了嚴(yán)格的規(guī)定[1]。

在農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)數(shù)量方面，我國仍處于起步階段。據(jù)報道，ZG的農(nóng)殘限量指標(biāo)分別是CAC的7.0%、歐盟的9.9%，涉及到的農(nóng)藥種類分別是CAC的35.6%，歐盟的68.4%。2014年頒布實施的GB 2763《食品中Zda農(nóng)藥殘留量》規(guī)定了387種農(nóng)藥在284種(類)食品中3650項限量指標(biāo)；而2014年正式實施的香港規(guī)例則對584種(類)食品農(nóng)產(chǎn)品中的360種農(nóng)藥，制定了7083項殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。未來，我國政府仍將保持較快的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)制修訂的速度，逐步縮小同發(fā)達(dá)國家的差距。這無疑對農(nóng)藥殘留等食品安全的檢測工作帶來了巨大挑戰(zhàn)。

氣相色譜三重四極桿串接質(zhì)譜GC-MS/MS由于其高通量、高靈敏度、高特異性的特性，逐漸替代單四極桿氣相色譜質(zhì)譜GC-MS，從而成為食品安全檢測領(lǐng)域的主力。目前，隨著檢測市場的發(fā)展以及檢測手段的普及，我國已經(jīng)陸續(xù)出臺

GC-MS/MS相關(guān)的一系列檢測法規(guī)，如YQ/T 47.1—2014《煙草及煙草制品多種農(nóng)藥殘留量的測定》，此行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了160種煙草中常見農(nóng)殘的檢測方法；2015年新版藥典規(guī)定應(yīng)用GC-MS/MS檢測中藥中74種常見的農(nóng)藥殘留等。

【樣品提取】

實驗前處理方法參照NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》。

【實驗/操作方法】

色譜方法

升溫程序：40℃(1.5min)_25℃/min_90℃(1.5min)_25℃/min_180℃_5℃/min_280℃_10℃/min_ (5 min)；

進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣（不分流時間：1min），進(jìn)樣口溫度270℃；

載氣流速：1.2 mL/min（恒流）

進(jìn)樣體積：1.0μL

質(zhì)譜方法

傳輸線溫度：280℃

離子源溫度：300℃

掃描方式：定時掃描-SRM模式（Timed -SRM）

【實驗結(jié)果/結(jié)論】

1.RT alignment

保留時間作為重要的定性依據(jù)，其準(zhǔn)確性至關(guān)重要。使用RT alignment功能，可快速的將當(dāng)前色譜狀態(tài)下的保留時間校準(zhǔn)到數(shù)據(jù)庫里的保留時間。當(dāng)然，也可以根據(jù)實際需要，校準(zhǔn)到先前某個狀態(tài)下的保留時間。兩者相差Zda不會超過0.2min。結(jié)合獨有的T-SRM掃描功能，也可提高保留時間漂移的容忍度。由此，無需任何標(biāo)準(zhǔn)品，即可快速的建立篩查方法，完成篩查或定量分析。

圖1.校準(zhǔn)后的保留時間與數(shù)據(jù)庫里的保留時間

表1. RT alignment結(jié)果示例

2.快速篩查方法建立

賽默飛TSQ 8000 Evo的數(shù)據(jù)庫共有食品安全及環(huán)境領(lǐng)域中常見的有機污染物1142種，每種化合物包含定量離子對、定性離子對、碰撞能量、保留時間和CAS號等相關(guān)信息。本次實驗主要篩查農(nóng)藥以及部分常見的環(huán)境污染物，因此選擇了其中933種作為篩查的對象對基質(zhì)樣品進(jìn)行分析。TraceFinder的主方法包含采集方法和數(shù)據(jù)處理方法，通過從TraceFinder的數(shù)據(jù)庫中選擇所有的化合物加入到空白主方法中，編輯相關(guān)數(shù)據(jù)處理參數(shù)，同時關(guān)聯(lián)到采集方法，可快速建立方法，同時完成樣品的采集及數(shù)據(jù)處理(如圖2、3所示)。

圖2.應(yīng)用TraceFinder數(shù)據(jù)庫中933種化合物進(jìn)行主方法的設(shè)定

圖3. TraceFinder數(shù)據(jù)庫中933種化合物關(guān)聯(lián)進(jìn)入儀器方法界面

3.快速篩查方法實現(xiàn)的前提

TSQ 8000 Evo獨有的T-SRM掃描不同于傳統(tǒng)的分段式掃描。傳統(tǒng)分段掃描模式按照目標(biāo)化合物的保留時間進(jìn)行不重疊的劃分時間段，每個時間段里根據(jù)流出的目標(biāo)化合物設(shè)定相應(yīng)的參數(shù)。隨著目標(biāo)化合物數(shù)目的增加，受質(zhì)譜掃描速度及數(shù)據(jù)掃描點數(shù)的限制，必然需要盡可能的細(xì)分時間段，確保每個時間段內(nèi)的組分盡可能的少。由此，保留時間的微小漂移勢必導(dǎo)致部分化合物不能完全采集的情況發(fā)生。需要定期用混標(biāo)重新定位保留時間，進(jìn)而重新分段，工作量很大。另一方面，每個時間段得到的化合物的掃描點數(shù)可能由于掃描時間的限制而過少。

T-SRM可以有針對性地進(jìn)行方法編輯，簡單來說，即化合物出現(xiàn)的時候才對化合物進(jìn)行掃描，每個化合物都是一個獨立的時間段，而各個時間段可以適當(dāng)調(diào)整，大大減少重疊的部分（如圖4所示），使得儀器掃描的效率得到Zda化。并且，不需要像分段掃描那樣，設(shè)置每個離子對的dwelltime，而是直接設(shè)置每個峰的掃描點數(shù)，至于掃描速度的調(diào)節(jié)，是由軟件本身自己完成的，這樣就使建立方法更加簡便。

圖4.傳統(tǒng)分段式SRM和T-SRM的效率比較

4.篩查結(jié)果

選取常見蔬菜如絲瓜、辣椒為實驗用基質(zhì)樣品，參考2.3前處理方法平行處理2份。一份為對照樣品，一份添加低濃度的混標(biāo)(<10ppb)，作為驗證樣品。應(yīng)用建立的933種化合物的篩查方法，進(jìn)行分析。所有添加農(nóng)殘均檢出，并得到準(zhǔn)確定量。篩查結(jié)果如下表。

表2.篩查結(jié)果

分別配制濃度為1ppb、10ppb、20ppb、40ppb、100ppb及200ppb的溶劑混標(biāo)，每個濃度水平連續(xù)進(jìn)樣6針，通過比較回讀值與理論值的偏差及RSD，進(jìn)一步考察線性范圍、穩(wěn)定性及標(biāo)曲的準(zhǔn)確性。結(jié)果見表3。

表3.部分農(nóng)藥組分標(biāo)曲回讀值、與理論濃度的偏差及RSD結(jié)果

分別對絲瓜（加標(biāo)）及辣椒（加標(biāo)）樣品，連續(xù)進(jìn)樣10針。通過峰面積計算RSD值。結(jié)果見表2。

圖5.基質(zhì)樣品RSD結(jié)果

為了考察儀器靈敏度，不斷稀釋標(biāo)品，大多數(shù)農(nóng)殘在濃度為0.5ppb時，依然有較好的響應(yīng)，部分農(nóng)藥在其他濃度有較好的峰形和靈敏度，相關(guān)色譜圖見圖6-8。

圖6.樂果(1ppb)

圖7.啶蟲脒(2ppb)

圖8.部分農(nóng)藥組分色譜圖（0.5ppb）

FullScan與SRM交替掃描

賽默飛TSQ 8000 Evo快速的掃描速度，能夠滿足在利用T-SRM掃描進(jìn)行篩查或定量的同時，進(jìn)行FullScan掃描。由此，既可以對目標(biāo)物進(jìn)行定量，也可以對可疑物質(zhì)進(jìn)行譜庫檢索定性，Tracefinder軟件可以同時提供定性與定量結(jié)果。

圖9. FullScan與SRM交替掃描儀器方法截圖

圖10.交替掃描離子對通道

圖11.實際質(zhì)譜圖與NIST譜庫比較圖

結(jié)論

本文應(yīng)用賽默飛三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀TSQ 8000 Evo，結(jié)合TraceFinder軟件實現(xiàn)了一針進(jìn)樣同時篩查933種農(nóng)藥及部分環(huán)境污染物的。在此條件下，依然能夠得到很好的方法學(xué)指標(biāo)。TSQ8000 Evo在農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留定性定量應(yīng)用領(lǐng)域，具有高選擇性、高靈敏度、高穩(wěn)定性和高通量的特點，完全能夠勝任監(jiān)管部門要求的實際樣品中不確定農(nóng)藥的低濃度篩查、確認(rèn)和定量分析的要求。

另一方面，TSQ 8000 Evo能夠?qū)崿F(xiàn)SRM與FullScan的交替掃描，能夠同時完成定性與定量的分析工作，能夠節(jié)約分析時間，大大提高實驗室的效率。

【儀器/耗材清單】

質(zhì)譜儀：TSQ 8000 Evo質(zhì)譜儀（賽默飛世爾科技，美國）；

氣相色譜儀：Trace1310氣相色譜配AI 1310自動進(jìn)樣器（賽默飛世爾科技，美國）；

色譜柱：TG-5SILMS 30 m×0.25 mm×0.25μm毛細(xì)管色譜柱；

試劑：正己烷，丙酮；

【參考文獻(xiàn)】

[1] http: / /www.mrldatabase.com/results.cfm