酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法定量測(cè)定三聚氰胺殘留利用萃取液通過均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進(jìn)行免疫測(cè)定先將三聚氰胺酶標(biāo)記物，樣品萃取物及標(biāo)準(zhǔn)加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應(yīng)在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物再用去離子水清洗結(jié)束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)孵育30分鐘后停止此反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值 需要準(zhǔn)備的材料： 1蒸餾水或去離子水 2可吸取50ul和100ul的移液器及吸頭 34000轉(zhuǎn)離心機(jī) 4吸水紙或相當(dāng)?shù)奈牧?5450nm的酶標(biāo)儀 6計(jì)時(shí)器 720mM PBS：需自行配制 8清洗液：需自行配制 試劑配制： 120mM PBS： 0.62g NaH2PO4•2H2O+5.73g Na2HPO4•12H2O+9g NaCl，蒸餾水定容至1000ml 2清 洗 液： 0.62g NaH2PO4•2H2O+5.73g Na2HPO4•12H2O+9g NaCl，蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20 樣品的前處理： 肉類(稀釋倍數(shù)：5) 1 稱1g肉樣，加入5ml的10%甲醇/20Mmpbs，震蕩2min； 2 4000轉(zhuǎn)離心5min； 3 取2ml 上清液加入2ml異辛烷：氯仿(2：3)，混勻； v4 4000轉(zhuǎn)離心5min，取上層150ul測(cè)定[/b] 測(cè)定過程： 1將所有試劑及樣品回升至室溫20-28，但不要放置超過24小時(shí)； 2從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條固定在微孔板架上，未使用的孔條與干燥劑一同放入密封袋中保存； 3吸取150ul標(biāo)準(zhǔn)品樣品到對(duì)應(yīng)微孔中，必須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取，避免交叉污染加入 50ul三聚氰胺酶標(biāo)記物到每個(gè)小孔中； 4輕輕搖板60秒，20-28攝氏度下孵育30分鐘； 5將微孔中的溶液倒入水槽中，用清洗液完全充滿微孔，震蕩后倒掉，重復(fù)三次，總共四次洗板； 6Z后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻轉(zhuǎn)微孔板在吸水紙上拍干； 7每個(gè)微孔中加入100ul底物溶液； 820-28攝氏度下，孵育30分鐘； 9每個(gè)微孔中加入100ul停止液； 10450nm下讀板 Mediwax-12固相萃取裝置_固相萃取儀