工作原理

無(wú)與倫比的光電檢測(cè)器

硅光電倍增管 (SiPM) 是基于硅基底的固態(tài)半導(dǎo)體器件，具備光子能級(jí)靈敏度，動(dòng)態(tài)范圍為 7.2 個(gè)數(shù)量級(jí)，是一款具有光子計(jì)數(shù)功能的緊湊檢測(cè)器。NovoCyte Penteon 設(shè)計(jì)中的創(chuàng)新光學(xué)器件包含 30 個(gè)獨(dú)立的 SiPM，可收集并處理來(lái)自每個(gè)熒光通道的信號(hào)。

出色的散射光分辨率，可檢測(cè)小顆粒

NovoCyte Penteon 散射光檢測(cè)光學(xué)系統(tǒng)和信號(hào)處理電子器件經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可以分辨粒徑小至 0.1 μm 的顆粒。憑借這種優(yōu)異的分辨率，可輕松識(shí)別和分析血小板、細(xì)菌和各種亞微米顆粒。

高重現(xiàn)性和穩(wěn)定性

NovoCyte Penteon 和 NovoCyte Quanteon 的液路系統(tǒng)專為提供高性能而設(shè)計(jì)。NovoCyte Penteon 和 NovoCyte Quanteon 擁有其他流式細(xì)胞儀無(wú)法比擬的液路一致性和穩(wěn)定性。使用蠕動(dòng)泵的其他儀器通常會(huì)受到液路脈動(dòng)的影響，導(dǎo)致絕 對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)不一致和不準(zhǔn)確。

應(yīng)用

凋亡分析

細(xì)胞凋亡也稱為細(xì)胞程序性死亡，是細(xì)胞調(diào)控自身死亡的過(guò)程，通過(guò)激活特定通路使細(xì)胞發(fā)生收縮、凝聚，并最 終通過(guò)吞噬作用被清除。這與壞死細(xì)胞死亡形成鮮明對(duì)比，壞死細(xì)胞死亡時(shí)細(xì)胞失控死亡并裂解，可產(chǎn)生免疫反應(yīng)異常激活等有害影響。因此，凋亡細(xì)胞以非常有序的方式死亡，可限制其對(duì)周圍細(xì)胞和組織的破壞。

多種方法可用于測(cè)定細(xì)胞死亡并區(qū)分其為凋亡還是壞死。NovoCyte 流式細(xì)胞儀具有自動(dòng)補(bǔ)償設(shè)置和寬熒光檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍，可輕松對(duì)檢測(cè)進(jìn)行定量，無(wú)需調(diào)整 PMT 電壓

免疫表型分析

免疫狀態(tài)與疾病狀態(tài)、治 療 效率以及對(duì)疫苗等外部刺激的反應(yīng)有關(guān)。免疫表型分析可快速識(shí)別候選細(xì)胞類型、亞類和功能。由于免疫細(xì)胞可能影響疫苗的免疫原性及其效能，因此監(jiān)測(cè)多種免疫細(xì)胞群的頻率以及特定細(xì)胞亞群（如單核細(xì)胞、NK 細(xì)胞、T 細(xì)胞和 B 細(xì)胞）的分化或活化狀態(tài)至關(guān)重要。NovoCyte 流式細(xì)胞儀可同時(shí)定量分析多種白細(xì)胞，以便更好地了解患者的免疫狀態(tài)并監(jiān)測(cè)機(jī)體對(duì)傳染病的免疫反應(yīng)。

細(xì)胞增殖

細(xì)胞增殖是一種重要功能，是高度結(jié)構(gòu)化的事件，如果不受控制，會(huì)導(dǎo)致疾病。我們可以通過(guò)絕 對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)或使用染料（例如 CFSE）測(cè)量增殖。當(dāng) CFSE 標(biāo)記的細(xì)胞發(fā)生分裂時(shí)，染料在子細(xì)胞之間平均分配，隨著染料的不斷稀釋，我們可以測(cè)量 CFSE 熒光隨時(shí)間的損失。此外，還繪制染料的平均熒光強(qiáng)度 (MFI) 與細(xì)胞濃度隨時(shí)間的變化曲線，以揭示兩者之間的反比關(guān)系。這類分析方法通常用于觀察 T 淋巴細(xì)胞活化的變化。

圖：使用 CFSE 測(cè)量 Jurkat T 細(xì)胞增殖。A) 使用 CFSE 標(biāo)記 Jurkat T 細(xì)胞，并通過(guò) NovoCyte 流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞隨時(shí)間的變化，以測(cè)定細(xì)胞分裂。每個(gè)峰值都對(duì)應(yīng)于一個(gè)單獨(dú)的時(shí)間點(diǎn)。B) 使用隨細(xì)胞分裂產(chǎn)生的信號(hào)稀釋，繪制絕 對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)與 CFSE 的平均熒光強(qiáng)度 (MFI) 隨時(shí)間的變化曲線。

細(xì)胞因子檢測(cè)

細(xì)胞因子是免疫細(xì)胞對(duì)病原體、自身免疫或治 療藥物的激活反應(yīng)所必需的小分子。細(xì)胞因子的信號(hào)傳導(dǎo)可以調(diào)節(jié)基因調(diào)控、先天免疫反應(yīng)和適應(yīng)性免疫反應(yīng)以及炎癥。因此，測(cè)量細(xì)胞因子產(chǎn)生并確定細(xì)胞因子產(chǎn)生的來(lái)源對(duì)于深入了解免疫反應(yīng)非常重要?；谖⑶虻牧魇郊?xì)胞術(shù)檢測(cè)是測(cè)量細(xì)胞因子的高效方法，可以使用具有不同熒光強(qiáng)度的混合微球來(lái)測(cè)量單個(gè)樣品中的多種可溶性分析物。

細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)檢測(cè)

對(duì)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的檢測(cè)和分析有助于細(xì)胞亞群和細(xì)胞過(guò)程的額外表征。為分析非細(xì)胞表面蛋白質(zhì)，需要進(jìn)行細(xì)胞固定和破膜。然而，許多磷酸特異性抗體與許多基于去垢劑的常用破膜方法（用于細(xì)胞內(nèi)染色）不兼容。在確定磷酸特異性抗體的適宜固定和破膜方法時(shí)，需要特別注意。最常見(jiàn)的方法是用 1.5% 多聚甲醛固定，然后用 100% 甲醇破膜。雖然這種方法適用于多種抗體，但請(qǐng)注意，并非每種磷酸特異性抗體都適用。

此外，在異質(zhì)性樣品中鑒定不同的細(xì)胞群，需要對(duì)表面蛋白連接的磷酸化蛋白進(jìn)行染色。必須特別考慮這些表位對(duì)固定劑的敏感性，并采取相應(yīng)預(yù)防措施，避免損害表位。因此，樣品在固定前可能需要對(duì)特定的表面標(biāo)記物進(jìn)行染色

細(xì)胞周期分析

正常的人體細(xì)胞是含有恒定數(shù)量 DNA 的二倍體。在細(xì)胞分裂的過(guò)程中，DNA 合成導(dǎo)致總 DNA 含量翻倍，隨后在有絲分裂后恢復(fù)正常的 DNA 含量。利用 NovoCyte 流式細(xì)胞儀，可以進(jìn)行詳細(xì)的細(xì)胞周期分析，了解腫瘤細(xì)胞分化、細(xì)胞轉(zhuǎn)化以及細(xì)胞與化合物之間的相互作用。

圖：在 10 μg/M MG132 或 500 μg/M 5-FU 處理 16 小時(shí)后，使用 ACEA NovoCyte 流式細(xì)胞儀分析 A549 細(xì)胞的細(xì)胞周期分布。NovoExpress 內(nèi)置的細(xì)胞周期分析模塊中的圖像顯示了處于 G0/G1 期（綠色）、S 期