腔腸素（Coelenterazine）是自然界中資源最豐富的天然熒光素，是絕大多數(shù)海洋發(fā)光生物（超過75%）的光能貯存分子。腔腸素可作為許多熒光素酶的底物，比如海腎熒光素酶（Rluc），Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc），以及包括水母發(fā)光蛋白（aequorin）和藪枝螅發(fā)光蛋白（Obelia）在內(nèi)的光蛋白（Photoproteins）。其發(fā)光原理是：以腔腸素為底物的熒光素酶在有分子氧的條件下，氧化腔腸素，產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物，并在此過程中發(fā)射藍色光，峰值發(fā)射波長約為450~480 nm。

腔腸素作為水母發(fā)光蛋白復(fù)合物（Aequorin）的組成成分，只有與鈣離子（Ca2+）結(jié)合后，才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide，同時釋放出CO2和藍色熒光（~466 nm）（圖1）。其具有以下幾個優(yōu)點：1）能檢測較大范圍的Ca2+濃度（0.1-100μM）；2）樣品無自體熒光，背景熒光較低，盡管信號較熒光鈣離子指示劑弱，但信噪比更高，因此具有較高靈敏度；3）Aequorin能夠穩(wěn)定維持在細胞內(nèi)，能夠進行數(shù)小時至數(shù)天Ca2+的監(jiān)測。

圖1. 腔腸素作為水母發(fā)光蛋白輔助因子的Ca2+依賴反應(yīng)流程

腔腸素具有能量轉(zhuǎn)移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）的特性：在底物腔腸素存在的情況下，熒光素酶（如Rluc）催化底物發(fā)生藍光，能量轉(zhuǎn)移到EYFP（增強的黃色熒光蛋白），發(fā)出綠光（~530 nm）。通過Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白兩者間的相互關(guān)系研究蛋白-蛋白之間的相互作用。BRET的信號可通過比較綠光和藍光的量來進行測定，消減了因細胞數(shù)、細胞類型和其他實驗變量而引起的數(shù)據(jù)變量。

主要應(yīng)用

1. 活體成像。

2. 報告基因檢測。

3. 檢測細胞/組織內(nèi)活性氧（ROS）水平：細胞和組織內(nèi)的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子能夠增強腔腸素在酶非依賴性的氧化體系中自發(fā)熒光。

4. 高通量篩選。

5. 監(jiān)測活細胞內(nèi)鈣離子水平。

產(chǎn)品描述

腔腸素f（Coelenterazine f）系天然腔腸素衍生物，是水母發(fā)光蛋白的底物。腔腸素f與天然腔腸素結(jié)構(gòu)上的差別在于氟（F）原子替換R-1位酚基上的羥基。腔腸素f和水母蛋白被氧化后活化，生成腔腸素的亞穩(wěn)態(tài)復(fù)合物。該復(fù)合物生成時間非常短，而天然腔腸素-水母蛋白復(fù)合物的生成反應(yīng)很慢（60 min內(nèi)僅有40%的天然腔腸素完成反應(yīng)）。與天然腔腸素-水母蛋白復(fù)合物產(chǎn)生的光子總數(shù)相比，此復(fù)合物僅產(chǎn)生80%的光子能。

腔腸素f與Ca2+接觸時，可快速且高產(chǎn)量的發(fā)光，產(chǎn)能強度是天然腔腸素的20倍。同時，腔腸素f具有最好的細胞滲透性。當需要極高的Ca2+檢測靈敏度來研究水母蛋白再生實驗時，推薦使用本底物。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸和保存方法

冰袋運輸。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性氣體環(huán)境下，避免接觸空氣。

腔腸素f工作液的配制

腔腸素f溶解：不溶于水。目前毒性最低的溶劑是100%乙醇，可配制濃度為0.1-1 mg/ml。加入pH低于7.0的酸性緩沖液（堿性pH會快速降解底物）稀釋成低濃度工作液。切忌溶于DMSO。

腔腸素f保存：建議溶液現(xiàn)配現(xiàn)用！體外實驗，需將稀釋后的工作液室溫放置20-30 min，方可穩(wěn)定工作。該工作液可室溫穩(wěn)定放置3-4 h，有非常微弱的信號衰減發(fā)生。不建議儲存液-20℃或更低溫度保存，因為其高能量的二氧環(huán)丁酮結(jié)構(gòu)即使在低溫的情況下也會發(fā)生降解，導(dǎo)致熒光強度明顯變?nèi)?。短時間保存條件：-70℃避光保存于塑料管內(nèi)（溶液中不含有Ca2+），且有惰性氣體保護。

注意事項

1.粉末最好使用惰性氣體（氮氣或氬氣），在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，長期保存于-70℃。管內(nèi)即使存在少量空氣，可能造成腔腸素n氧化失活，造成在不同試驗間的量化分析結(jié)果無法比較。

2.本品接觸空氣，水或者任何氧化試劑會不穩(wěn)定。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

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