細胞凍存管應如何解凍? 可能原因：

　　(1)胰蛋白酶消化過度

　　(2)支原體污染

　　(3)消化液或培養(yǎng)液配制錯誤、過期儲存、儲存不當

　　(4)細胞老化(如傳代細胞已匯合導致失去貼附性)

　　接種細胞起始濃度太低或太高 解決辦法：

　　1. 準備一個培養(yǎng)容器，內(nèi)裝合適體積的適宜培養(yǎng)基，并使其溫度和pH與建議的相稱 。

　　2. 在37℃或該細胞系正常生長溫度水浴下通過輕柔搖動迅速溶解凍存管(約2分鐘);

　　3. 管中內(nèi)容物溶解后立刻將凍存管移到超凈工作臺內(nèi)，并用70%酒精消毒表面防止污染，注意無菌操作。

　　4.  擰開凍存管蓋，將管中內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到已裝有少量培養(yǎng)液的無菌離心管中稀釋，離心(一般125g，10分鐘)，棄去上清并用1~2ml培養(yǎng)基重新懸浮沉淀細胞，然后轉(zhuǎn)移細胞懸浮液到培養(yǎng)容器內(nèi)混合均勻。注意：如果凍存液中含5% DMSO，則不必離心，只需用15ml培養(yǎng)液懸浮即可。

　　5.  24小時后檢查培養(yǎng)情況，如果需要的話進行擴傳。有些細胞系(比如雜交瘤細胞)從凍存狀態(tài)恢復需要幾天時間。 實際上，一些雜交瘤細胞在天培養(yǎng)液中出現(xiàn)死亡細胞并產(chǎn)生許多細胞殘骸。許多細胞凍存后活力下降并在融化后24小時到一個狀態(tài)。此后細胞將恢復并進入對數(shù)生。細胞復蘇過程不是很難，主要是速溶這步很關(guān)鍵。再有，細胞復蘇的狀態(tài)如何，較大程度上取決于細胞凍存時的操作。還有一點，細胞也是有思想的，你對他好，關(guān)心他照顧他，他也不會讓你失望的。

      注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師

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