提取得到DNA分子以后,其數(shù)量和質(zhì)量需要通過電泳技術(shù)來檢測。自從在核酸研究中引入瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠以來,根據(jù)相對分子質(zhì)量大小分離DNA的凝膠電泳技術(shù),已經(jīng)發(fā)展成為一種對DNA分子分析鑒定的重要實驗手段。基因操作的核心技術(shù)之一就是瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳。對于DNA片段的分離、鑒定和純化,可以使用它們。該技術(shù)操作簡單,速度快,DNA重組、DNA核苷酸序列分析、DNA限制性內(nèi)切酶分析及限制性酶切作圖等的技術(shù)以它們?yōu)榛A(chǔ)。它們已經(jīng)是許多通用的分子生物學(xué)研究方法。
凝膠電泳的顯色
利用熒光染料溴化乙錠進行染色是觀察凝膠中DNA的Z簡便、Z常用的方法。溴化乙錠是一種核酸染料,其具有扁平分子,在高離子強度下,大概每2.5個堿基就會有一個溴化乙錠分子插入。在DNA溴化乙錠復(fù)合物中,染料接收DNA吸收的254nm處的紫外輻射,再和染料分子本身吸收302nm和399nm的光輻射結(jié)合,所以可在可見光譜紅橙區(qū)的590nm處將吸收的能量重新發(fā)射出來。

所以對核酸分子染色之后,在紫外光下觀察電泳標(biāo)本,便能夠?qū)⒛z介質(zhì)中DNA的譜帶部位十分敏感而方便地檢測出來,甚至能夠清晰地顯現(xiàn)出每條DNA帶中含有的微量DNA。在適當(dāng)?shù)娜旧珬l件下,DNA片段的數(shù)量越多,熒光的強度越大。在包含有幾種DNA片段的電泳譜帶中,每一條帶的熒光強度是在Zda的DNA片段到Z小的DNA片段方向慢慢減弱的。
凝膠電泳的分辨能力
凝膠的類型和濃度對于凝膠的分辨能力會有影響。0.2~50kb為瓊脂糖凝膠分辨DNA片段的范圍,聚丙烯酰胺凝膠有更加高的分辨能力,能夠?qū)⑤^小分子質(zhì)量的DNA片段分辨出來,1~1000bp為其分辨范圍。凝膠介質(zhì)孔隙的大小受到凝膠濃度的高低影響。濃度越高,孔隙越小,其擁有更強的分辨率。反之濃度降低,孔隙就增大,其擁有更弱的分辨率。
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