提取得到DNA分子以后,其數(shù)量和質(zhì)量需要通過電泳技術(shù)來檢測。自從在核酸研究中引入瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠以來,根據(jù)相對分子質(zhì)量大小分離DNA的凝膠電泳技術(shù),已經(jīng)發(fā)展成為一種對DNA分子分析鑒定的重要實(shí)驗手段?;虿僮鞯暮诵募夹g(shù)之一,就是瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳。對于DNA片段的分離、鑒定和純化,可以使用它們。該技術(shù)操作簡單,速度快,DNA重組、DNA核苷酸序列分析、DNA限制性內(nèi)切酶分析及限制性酶切作圖等的技術(shù)以它們?yōu)榛A(chǔ)。它們已經(jīng)是許多通用的分子生物學(xué)研究方法。
分類
1.瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠電泳
瓊脂糖來源于紅色海藻產(chǎn)物瓊脂,其是一種線性多糖聚合物,電泳介質(zhì)是由將瓊脂糖溶液加熱到沸點(diǎn)后冷卻凝固形成的,它的密度取決于瓊脂糖的濃度。經(jīng)過化學(xué)修飾的低熔點(diǎn)(LMP)的瓊脂糖,具有比較脆弱的結(jié)構(gòu),所以即使溫度較低也會熔化,可以在DNA片段的制備電泳被使用。

聚丙烯酰胺凝膠主要有兩種方式:
(1)非變性聚丙烯酰胺凝膠
被用來對雙鏈DNA片段分離和純化。堿基組成和序列對DNA的遷移率產(chǎn)生影響是未變凝膠中分離DNA的缺點(diǎn)。因為未知DNA的遷移是否反常沒有辦法知道,所以雙鏈DNA的大小不能使用未變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳來確定。
(2)變性聚丙烯酰胺凝膠
被用來對單鏈DNA片段分離及純化,這類聚丙烯酰胺凝膠是在核苷酸堿基配對YZ劑(尿素或甲酰胺)的存在下聚合而成,堿基組成及序列幾乎不會影響到變性DNA的移動速度,因此被用來對DNA測序以及對單鏈DNA片段分離及純化等。
2.脈沖電場凝膠電泳
超大分子量的DNA分子顯然是沒有辦法使用普通的凝膠電泳技術(shù)來進(jìn)行分離的。1984年,D.C.Schwartz和C.R.Cantor發(fā)明的脈沖電場凝膠電泳技術(shù),可以成功地用來對整條染色體這樣的超大分子量的DNA分子進(jìn)行分離。
在常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳中,如果雙鏈DNA分子超過一定大小范圍,那么它們都會以相同的速率移動的。這是由于在單向恒定電場的作用下,它們只是通過“一端向前”的方式游動穿過整個膠板。而在脈沖電場中,隨著所用的電場方向的周期性改變,DNA分子的遷移方向也在不斷的變化。
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