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• 2023-06-05 11:52發(fā)布了行業(yè)資訊

  展會邀請|锘海誠邀您參加第七屆細胞生物產(chǎn)業(yè)大會

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• 2023-04-19 14:07發(fā)布了行業(yè)資訊

  新聞速遞 | 锘海春季巡講系列講座及實操培訓

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• 2023-03-29 10:49發(fā)布了行業(yè)資訊

  锘海入選上海市2023年第一批科技型中小企業(yè)榜單

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• 2023-03-23 11:24發(fā)布了行業(yè)資訊

  锘海LS18平鋪光片顯微鏡簡介

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• 2023-03-22 11:13發(fā)布了行業(yè)資訊

  全新生物組織透明化試劑盒(水性)&生物組織膨脹試劑盒

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• 2023-03-22 11:10發(fā)布了行業(yè)資訊

  如何實現(xiàn)納米藥物的靶向遞送？

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• 2023-02-17 13:16發(fā)布了行業(yè)資訊

  核酸脂質(zhì)納米?？破铡猂NA-LNP包封率測定

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• 2023-02-17 13:16發(fā)布了問答

  核酸脂質(zhì)納米粒科普——RNA-LNP包封率測定

  自新冠mRNA疫苗成功上市以來，脂質(zhì)納米粒（Lipid nanoparticle，LNP）已成為mRNA、siRNA、pDNA等核酸的優(yōu)先遞送載體，廣泛用于mRNA疫苗及治愈。微流控技術(shù)是目前制備核酸脂質(zhì)納米粒常用的技術(shù)，包封率則是評價其制備效果的重要指標之一，下面就為大家介紹使用RiboGreen測定RNA-LNP包封率的方法。1 RiboGreen檢測RNA-LNP包封率的原理1.1RNA-LNP包封率（Encapsulationefficiency，EE）：包裹在脂質(zhì)納米粒內(nèi)部的RNA占RNA-LNP溶液中全部RNA的比例。1.2 RiboGreen檢測RNA原理：RiboGreen是一種用于定量檢測溶液中RNA含量的超敏感熒光核酸染料，當RiboGreen熒光染料處于溶液狀態(tài)時，幾乎沒有熒光活性，與RNA結(jié)合時，其熒光活性將增加1000倍。RiboGreen-RNA復(fù)合物的熒光激發(fā)波長約500nm，發(fā)射波長約525nm，通過酶標儀，建立已知濃度RNA的標準曲線，即可得到樣品RNA濃度。1.3 RiboGreen檢測包封率原理：分別測定LNP-RNA溶液中游離RNA濃度，以及用Triton-100破壞LNP結(jié)構(gòu)后，溶液中全部的RNA濃度，兩者的差值就是包封在LNP內(nèi)部的RNA濃度。通過以下公式即可計算得到包封率結(jié)果。圖1核酸脂質(zhì)納米顆粒的示意圖2操作要點2.1制備Buffer1X TE Buffer：使用試劑盒中20X TE Buffer稀釋。2% Triton-TE buffer：使用Triton-100與1X TE buffer以體積比1：50配制。2.2添加RNA-LNP樣品至全黑96孔板根據(jù)制備時RNA的量，可以大致計算需要稀釋的倍數(shù)。例如，已知 mRNA的原始質(zhì)量或濃度，使用銘汰MicroFlow S進行RNA-LNP合成，根據(jù)稀釋、超濾等處理后的最終體積，即可估算大致總RNA濃度。同時，假設(shè)90%的包封率，即可估算游離RNA濃度。然后根據(jù)標曲的濃度計算需要稀釋的大致倍數(shù)。這樣我們就可以使用1X TE buffer將RNA-LNP稀釋適合倍數(shù)以檢測LNP外游離RNA濃度，使用2% Triton-TE buffer將RNA-LNP稀釋適合倍數(shù)以檢測總RNA濃度，建議每項檢測至少兩個不同稀釋倍數(shù)。然后，分別移取100 μL稀釋后的樣本，添加到全黑96孔板。2.3標樣添加一般直接使用試劑盒中100 μg/mL的RNA標樣，也可以使用與待測樣本類似的RNA標樣來建立標準曲線?？梢韵扔?X TE buffer將原始標樣稀釋到工作濃度4 μg/mL，然后參考表1的體積比，配制為一定濃度梯度的標樣。分別移取各濃度的標樣100 μL，添加到全黑96孔板中。注：*最終RNA濃度考慮了步驟2.4添加RiboGreen染料后的濃度當RNA-LNP樣品及特定濃度的標樣添加到96孔板后，需要在37℃下避光孵育10 min，以使RNA-LNP在Triton buffer中充分裂解。2.4 RiboGreen染料添加把試劑盒中RiboGreen試劑，使用1X TE Buffer按照1：100的比例稀釋，例如需要2000 μL RiboGreen染料，可將20 μL的RiboGreen試劑添加到1980 μL的1X TE Buffer中。然后各取100 μL加入到已經(jīng)加有樣品的96孔板中，37℃下避光孵育5min。圖2 樣品添加2.5酶標儀檢測打開酶標儀，選擇熒光模式，激發(fā)光485nm，發(fā)射光528nm，讀數(shù)，記錄數(shù)據(jù)。 2.6數(shù)據(jù)處理及分析    將每個樣本測得的熒光值減去空白熒光值，即可得到實際熒光值。根據(jù)標樣的熒光值和濃度梯度，繪制標準曲線，得到回歸方程。把樣品熒光值代入回歸方程，乘以稀釋倍數(shù)，即可得到樣本的RNA濃度。根據(jù)1.3中包封率公式計算得到包封率結(jié)果。圖3 標準曲線3 小結(jié)準確的包封率測定對于評價RNA-LNP的包封效果至關(guān)重要，影響著后續(xù)細胞實驗和動物實驗的開展。RNA-LNP包封率測定一般使用商業(yè)化的試劑盒，雖然操作環(huán)節(jié)較多，但只要細心規(guī)范，操作起來也并不難，相信大家可以得到準確的實驗結(jié)果。納米藥物制備系統(tǒng)應(yīng)用范圍：

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• 2023-02-13 10:39發(fā)布了行業(yè)資訊

  組織透明化與點擊化學相結(jié)合的新技術(shù)CATCH

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• 2023-02-13 10:39發(fā)布了問答

  組織透明化與點擊化學相結(jié)合的新技術(shù)CATCH

  在完整組織中觀察藥物靶點相互作用的工具一直是理解體內(nèi)藥物作用的主要障礙。2022年發(fā)表在Cell上的題為“Insitu identification of cellular drug targets in mammalian tissue”的文章有突破性進展，作者通過修改和整合點擊化學（CC）與組織透明化技術(shù)，開發(fā)了一種方法——透明輔助組織點擊化學（Clearing-Assisted Tissue Click Chemistry，簡稱CATCH），允許小分子藥物-靶點相互作用在亞細胞分辨率下進行標記和成像(圖1A)。該技術(shù)為組織中小分子的體內(nèi)相互作用可視化提供了一個有價值的平臺，并能夠識別藥物在哺乳動物組織中的分布和參與。圖1 CATCH技術(shù)的方法開發(fā)1.組織透明化極大地改善了哺乳動物組織中的化學標記作者對小鼠給藥脂肪酸酰胺水解酶（FAAH）緩聚劑PF7845-yne（末端含炔基），通過CuAAC點擊化學反應(yīng)，炔基與熒光標簽的疊氮化物反應(yīng)形成疊氮炔環(huán)，進而引入熒光基團。初始試圖直接成像藥物結(jié)合的FAAH，但由于信噪比較差，未能顯示細胞靶標。因而猜測腦組織構(gòu)成復(fù)雜，其致密的脂膜可能影響點擊化學反應(yīng)，作者測試了基于聚丙烯酰胺的水凝膠組織透明化方法CLARITY，結(jié)果發(fā)現(xiàn)去除脂質(zhì)后顯著提升了成像的信噪比（圖1C、D）。作者同時也驗證了其他的透明化方法也得到了類似的效果（圖1E）。此外，作者還比較了不同的點擊化學配體（TBTA，BTTAA，BTTP）及不同的銅離子濃度下的反應(yīng)效率，發(fā)現(xiàn)使用BTTP，150 μM硫酸銅條件下可獲得高信噪比且穩(wěn)定的成像（圖1B）。2.CATCH實現(xiàn)了藥物-靶點接觸的全腦、亞細胞原位成像為了驗證CATCH應(yīng)用的廣泛性，作者對三種小分子藥物FAAH緩聚劑PF7845-yne、BIA10-2474-yne和單胺氧化酶（MAO）緩聚劑Pargyline-yne進行CATCH成像，結(jié)果清晰展示了藥物-靶點在小鼠不同腦區(qū)的分布（圖2A-E）。另外，還可以展示這些分子主要靶向的細胞類型，F(xiàn)AAH緩聚劑主要靶向新皮質(zhì)和海馬中的神經(jīng)元樣結(jié)構(gòu);而Pargyline-yne主要結(jié)合全腦的血管樣結(jié)構(gòu)，少量下丘腦和腦橋內(nèi)稀疏但特異標記的神經(jīng)元樣結(jié)構(gòu)（圖2F）。圖2 全腦藥物結(jié)合的可視化2.CATCH可與熒光標記復(fù)合以識別靶細胞類型作者在給藥處理后進行NeuN免疫染色，發(fā)現(xiàn)PF7845-yne和BIA10-2474-yne主要與新皮質(zhì)、海馬和杏仁核中的NeuN+神經(jīng)元共定位。而在腦橋中發(fā)現(xiàn)了一小群神經(jīng)元樣結(jié)構(gòu)，它們是NeuN陰性但被 pargyline-yne 靶向的（圖3A-D）。隨后作者洗脫NeuN并重新孵育TH抗體驗證該推測，確定了NeuN-，Pargyline-yne陽性的細胞的確是LC-NA神經(jīng)元（圖3E）。由此證明，CATCH可以和熒光標記結(jié)合揭示了藥物結(jié)合的細胞類型，并且可以區(qū)分神經(jīng)元不同部分的藥物靶標參與位點，可以支持多輪的藥物靶向細胞類型鑒定。圖3 藥物靶點的細胞型鑒定锘海團隊自主研發(fā)的組織透明化試劑盒可以高效地進行脫色脫脂，采用親水性溫和環(huán)境的設(shè)計，在組織熒光保護、樣本形態(tài)維持、降低自發(fā)熒光等方面表現(xiàn)出比較優(yōu)異的性能，適用范圍廣、操作簡便、速度快、效率高。

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• 2023-02-07 16:17發(fā)布了行業(yè)資訊

  锘海成功入選“2022年上海創(chuàng)新型中小企業(yè)”

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• 2023-02-07 16:17發(fā)布了問答

  锘海成功入選“2022年上海創(chuàng)新型中小企業(yè)”

  上海市經(jīng)濟和信息化委員會開展了2022年創(chuàng)新型中小企業(yè)評定工作，已于1月16日公示通過審核的企業(yè)名單，锘海生物科學儀器（上海）有限公司成功入選“2022年上海市松江區(qū)創(chuàng)新型中小企業(yè)”什么是創(chuàng)新型中小企業(yè)「上海市創(chuàng)新型中小企業(yè)」是根據(jù)《上海市優(yōu)質(zhì)中小企業(yè)梯度培育管理實施細則》（滬經(jīng)信規(guī)范〔2022〕8號），經(jīng)過嚴格的專家評審和綜合評估后，符合認定標準并予以認定、公示的一項重要資質(zhì)。該榜單的入選標志著锘海進入優(yōu)質(zhì)中小企業(yè)培育庫，展現(xiàn)出锘海具有較高專業(yè)化水平和較強創(chuàng)新能力和發(fā)展?jié)摿?，同時表明锘海主營業(yè)務(wù)和發(fā)展符合國家產(chǎn)業(yè)政策及相關(guān)要求。此次入選上海市創(chuàng)新型中小企業(yè)，是政府與行業(yè)對锘海技術(shù)水平、研發(fā)能力、業(yè)務(wù)發(fā)展及綜合實力等方面的認可和肯定。锘海也將緊跟科技和產(chǎn)業(yè)發(fā)展前沿，持續(xù)加大研發(fā)投入，加快技術(shù)突破，為行業(yè)發(fā)展提供源源不斷的創(chuàng)新動能，一如既往的為用戶提供更加專業(yè)、便利的產(chǎn)品和服務(wù)。關(guān)于锘海锘海生命科學成立于2017年，2020年獲得國家高新技術(shù)企業(yè)資質(zhì)?？偛课挥谏虾ｄ詈記荛_發(fā)區(qū)松江園區(qū)內(nèi)，在北京，廣州，成都，沈陽等十余座城市設(shè)有辦事處。作為“生命科學的服務(wù)者，醫(yī)療創(chuàng)新的推動者“，致力于打造完整的生命科學儀器研發(fā)、制造、服務(wù)體系。我們積極推進科學技術(shù)轉(zhuǎn)化，在大組織3D熒光成像中，處于光片顯微鏡行業(yè)的先進地位，自主研發(fā)的LS18平鋪光片顯微鏡解決了傳統(tǒng)光片顯微鏡中空間分辨率、光學層析能力和成像視野大小之間的矛盾，滿足高通量、準確定位的熒光成像分析需求。此外，锘海還有納米藥物制備系統(tǒng)及納米藥物制備、檢測服務(wù)—從篩選到制劑表征全線過程，適用于臨床前研究和符合GMP的臨床生產(chǎn)，目前，锘海已服務(wù)國內(nèi)多家知名藥企并具備成功申報臨床的案例。

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• 2023-01-31 15:29發(fā)布了行業(yè)資訊

  凍干技術(shù)在mRNA疫苗領(lǐng)域的突破性應(yīng)用

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• 2023-01-28 09:50發(fā)布了行業(yè)資訊

  光聲科普 | 光聲信號原理及常見顯影劑

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• 2022-12-22 16:47發(fā)布了行業(yè)資訊

  锘海LS18平鋪光片顯微鏡榮獲2022年首屆“金燧獎”中國光電儀器品牌榜銀獎

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• 2022-12-15 16:24發(fā)布了行業(yè)資訊

  锘海誠摯邀請您參加第十三屆華人生物學家協(xié)會2022雙年會

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