在選擇液相色譜儀色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在1**%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受1**%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱。

液相色譜儀色譜柱選擇的思路

　　1、確定分離目的，確定液相色譜儀是否要求高分離度、短分析時間、高靈敏度、長柱壽命，低的實驗成本等。

　　2、評估分析物的化學(xué)性質(zhì)，諸如化學(xué)結(jié)構(gòu)、溶解性、穩(wěn)定性等。

　　3、選擇合適的色譜柱，了解色譜填料的物理和化學(xué)性質(zhì)。

液相色譜儀色譜柱選擇的條件

　　1、填料基質(zhì)

　?、俟枘z基質(zhì)：純度高本錢低，強度大，化學(xué)修飾輕易，但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。

　?、诰酆衔锘|(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬，溫度穩(wěn)定(高溫可以達到80度以上)，機械強度小。

　　2、顆粒外形

　　大多現(xiàn)代液相色譜儀填料都是球形顆粒，但有時是不規(guī)則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時;不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對低廉的價格。

　　3、顆粒粒徑

　　粒徑越小柱效越高、分離度越高，但同時會導(dǎo)致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品，液相色譜儀可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。

　　4、含碳量

　　含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。高含碳量進步柱容量、分辨率及分析時間，用于要求高分離度的復(fù)雜樣品;低含碳量分析時間短、展現(xiàn)不同的選擇性，用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。

　　5、孔徑和比表面積

　　液相色譜儀吸附介質(zhì)是多孔的顆粒，盡大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi)。因此，分子必須進進孔內(nèi)才能被吸附和分離。

　　孔徑和比表面積是相輔相成的兩個概念?？讖叫”缺砻娣e大，反之亦然。比表面積大，增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng)，增加保存，上樣量和復(fù)雜成分的分離度;比表面積小，平衡時間快，適合梯度分析。

　　6、孔容和機械強度

　　孔容，又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應(yīng)填料的機械強度?？左w積大的填料相對孔體積小的填料機械強度要略弱?？左w積為1.5mL/g或更小的填料大多用于液相色譜儀分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。

　　7、封端

　　封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對封端鍵合相會產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品。

液相色譜儀色譜柱填料的選擇

　　液相色譜儀中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。

　　一、硅膠基質(zhì)填料

　　1、正相色譜

　　正相色譜用的固定相通常為硅膠以及其它具有極性官能團，如胺基團和氰基團的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基或其它極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份Zxian被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如：正己烷、氯仿、二氯甲烷等。

　　2、反相色譜

　　反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。

　　樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份Zxian被沖洗出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。常用的反相填料有：C18、C8、C4、C6H5等。

　　二、聚合物填料

　　聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優(yōu)點是在pH值為1～14均可使用。相對于硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。現(xiàn)有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。

　　三、其它無機填料

　　其它無機填料液相色譜儀色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì)，一般于特殊的用途。

　　石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體，又由于在液相色譜儀流動相中不會被溶解,這類柱可在任何pH與溫度下使用。

　　氧化鋁也可用于液相色譜儀，氧化鋁微粒剛性強，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點是可在pH高達12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應(yīng)用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應(yīng)用。

　　新型氧化鋯基質(zhì)色譜填料也可用于液相色譜儀，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用pH范圍1～14，溫度可達100℃。由于氧化鋯填料是Z近幾年才開始研究，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進行中。