流式細(xì)胞術(shù)工作原理是在細(xì)胞分子水平上通過(guò)單克隆抗體對(duì)單個(gè)細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析。它可以高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù)，具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好的優(yōu)點(diǎn)，是當(dāng)代Z先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)之一。下面就讓小編帶你了解一下流式細(xì)胞儀熒光抗體組合的選擇。

用不同顏色的熒光素來(lái)標(biāo)記不同類別的單克隆抗體，能夠在一個(gè)細(xì)胞中同時(shí)分析多個(gè)抗原分子，然而不是所有熒光抗體都能夠自由的組合的，在確定組合之前，還需要注意下列因素。

1.流式細(xì)胞儀的類型和熒光光譜

挑選合適的光源作為熒光物質(zhì)的激發(fā)光源，流式細(xì)胞儀的光譜濾光片能夠接受被檢測(cè)的熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光。

2.了解不同抗體的染色模式和細(xì)胞反應(yīng)譜

依據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇抗體。

胞膜和胞內(nèi)染色：一般來(lái)說(shuō)，先胞膜染色，固定，然后膜通透和胞內(nèi)染色，Z后DNA染色。

3.抗體結(jié)合熒光素的熒光強(qiáng)度

任何一種熒光素的相對(duì)熒光強(qiáng)度都不相同。一個(gè)特定的抗體，要區(qū)分陰性和陽(yáng)性的結(jié)果，就是有很好的S/N比值，由該抗體使用哪一種熒光素標(biāo)記決定。

4.抗原的密度

幾乎所有熒光素標(biāo)記的抗體都能夠檢測(cè)高表達(dá)的抗原。但是低表達(dá)的抗原（例如細(xì)胞因子）就需要用高S/N比值的熒光素標(biāo)記的抗體來(lái)檢測(cè)，從而有效的區(qū)分陽(yáng)性細(xì)胞群和陰性細(xì)胞群。

5.熒光光譜之間的重疊

在多色分析中，雖然能夠用熒光補(bǔ)償去除熒光光譜重疊對(duì)結(jié)果的影響，但是分析中使用的熒光探針的類別越多，補(bǔ)償?shù)膹?fù)雜性就會(huì)越大，所以分析時(shí)，Z好選擇光譜重疊較少的組合。

6.自發(fā)熒光

所有的細(xì)胞群的自發(fā)熒光的水平都不一樣，在高波長(zhǎng)范圍內(nèi)（波長(zhǎng)>600nm），自發(fā)熒光會(huì)快速降低。所以在檢測(cè)自發(fā)熒光水平比較高的細(xì)胞時(shí)，如果想要得到好的S/N比值，就要使用發(fā)射光波長(zhǎng)比較長(zhǎng)的熒光染料。

7.熒光素的溶度，試劑的質(zhì)量都能造成假陰性/陽(yáng)性結(jié)果

一個(gè)抗體組合內(nèi)的抗體可能來(lái)自不同的公司，有不同的濃度和亞型，因此，需要自身的同型對(duì)照，但現(xiàn)實(shí)是非常難的。所以Z好選擇同一家公司的試劑以免干擾。