實時熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一種在DNA擴增反應中，以熒光化學物質(zhì)測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過內(nèi)參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。下面就讓小編為你具體介紹一下。

實時熒光定量PCR

傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限通過實時熒光定量PCR技術有效地解決了。每一輪循環(huán)均可檢測一次熒光信號的強度被實現(xiàn)了，并且在電腦軟件之中記錄，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因而，實時熒光定量PCR之所以無需內(nèi)標是因為其建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值與起始模板的線性關系

因為Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，，能夠利用標準曲線定量測定未知樣品。所以，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

和內(nèi)標法相比，外標準曲線的定量方法更科學，更準確、更值得信賴。迄今為止，已得到全世界的公認，定量Z準確，重現(xiàn)性Z好的定量方法就是外標準曲線的實時熒光定量PCR。

2）Ct值的重現(xiàn)性

當PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）剛剛進入，這個時候，誤差尚未放大，仍很微小，所以

Ct值的重現(xiàn)性極好，也就是說，無論是同一時間不同管內(nèi)擴增，還是同一模板不同時間擴增，得到的都是恒定的Ct值。

實時熒光定量PCR在基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物LX考核、病原體檢測等諸多領域得到廣泛地應用。

實時熒光定量PCR的定量方法

在Real-timePCR中，模板定量有相對定量和定量兩種策略。

優(yōu)勢

Ct值（限制點的循環(huán)數(shù)）指的是樣品到達域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。為了使獲得的數(shù)據(jù)Z準確，可重復，域值應設定在使指數(shù)期的擴增效率為Zda。若標有相應濃度的標準品同時擴增，一條可以用來計算未知樣品的濃度的標準曲線將由線性回歸分析產(chǎn)生。

在“Torsch”診斷中的應用

在妊娠早期（1-3個月），胎兒容易因為感染某些病原微生物而畸形，有弓體（TOX）、風疹病毒（RV）、單純皰疹病毒（HSV）、沙眼衣原體（CT）、及巨細胞（HCMV）是這些病原體中Z常見的。對這幾種病原體的檢測按照它們的英文詞首簡稱為Torsch試驗。