酶標儀在實驗室中的應(yīng)用越來越普及，酶標儀的檢定也就越來越重要。酶標儀的檢定內(nèi)容主要包括干涉濾光片波長誤差及重復性、吸光度誤差、穩(wěn)定性和重復性、儀器靈敏度、通道差異及吸光度的線性。

　　吸光度示值穩(wěn)定性(r)的檢定：

　　選用492nm波長或儀器特有的專一波長，將吸光度標稱值為1.0A的光譜中性濾光片，平放在微孔酶標板的空板架上，以空氣為參比，測量并記錄酶標儀的初始吸光度示值(A₀)，5min、10min后分別再測一次。吸光度示值穩(wěn)定性(r)計算：r等于后兩次吸光度示值的Zda值與A₀的差。

　　波長示值誤差和波長重復性的檢定：

　　從酶標儀取出儀器所用有標稱波長(λ)的干涉濾光片(405，450，492，620nm)，使用波長示值誤差優(yōu)于±0.5nm的分光光度計，將干涉濾光片用1mm左右銅或鋁金屬絲懸掛固定于分光光度計比色杯架第二孔右外側(cè)，干涉濾光片平面需與入射光束垂直。以1nm的改變幅度，從低到高，檢測各干涉濾光片在(±20)nm范圍內(nèi)的透射比，繪制波長一透射比特性曲線，求出峰值波長(λ_i)，每片干涉濾光片重復檢測三次并求峰值波長均值。

　　干涉濾光片波長示值誤差(△λ)計算：△λ=峰值波長均值-λ;波長重復性(δ_λ)計算：δ_λ等于三次檢測峰值波長Zda值和Z小值之差。

　　吸光度示值誤差的檢定：

　　先將吸光度標稱值(A)分別為0.2，0.5，1.0，1.5的四塊光譜中性濾光片(分光光度計附件)，在分光光度計上依次選用405，450，492，630nm波長或酶標儀特有的專一波長，以空氣為參比，檢測光譜中性濾光片的吸光度。每個濾光片每個波長檢測三次，取均值作為該片在該波長下的吸光度標準值(As)。然后，將四塊光譜中性濾光片同時平放在微孔酶標板的空板架上，以空氣為參比，酶標儀連續(xù)測量3次，依次記錄儀器吸光度示值，并計算平均值(Ax)。

　　吸光度示值誤差(△A)計算：△A=Ax-As，取計算后的所有△A中的誤差Zda值作為該酶標儀的吸光度示值誤差。

　　吸光度重復性的檢定：

　　按吸光度示值計算的方法將吸光度標稱值(A)為0.5或1.0光譜中性濾光片，以空氣為參比，于酶標儀微孔酶標板的空板架某一固定孔位重復測定6次(n)，記錄每一次吸光度(X_i)，求吸光度均值，按下式計算RSD偏差值(RSD)，以RSD表示儀器吸光度重復性。

　　靈敏度檢定：

　　選用450nm波長或儀器特有的專一波長，使用量程適合并檢定合格的A級加樣器，在未包被的空板條某一孔加入200μl含鉻量為5mg/L的重鉻酸鉀溶液，測量并記錄吸光度值(A_m)，此吸光度值即為酶標儀靈敏度。

　　通道差異檢定：

　　多通道酶標儀選用450nm波長或儀器特有的某一波長，將吸光度標稱值為1.0A光譜中性濾光片置于空板架上，以空氣為參比，依次檢測該濾光片在各通道的吸光度。通道差異(δ_A)計算：δ_A等于所有通道檢測吸光度中Zda值和Z小值的差。

　　線性驗證：

　　將含鉻量為700mg/L的重鉻酸鉀溶液和0.05mol/L的硫酸溶液按比例(0：7，1：6，2：5，3：4，4：3，5：2，6：1，7：0)配成不同稀釋度的系列溶液共8管，每管取200μl加入未包被的空板條微孔，以450nm/630nm雙波長檢測吸光度，重復測定兩次取均值，進行回歸分析，計算相對標準估計誤差(S_y,x)。

　　檢定結(jié)果的判斷標準：

　　參照計量性能要求，酶標儀檢定結(jié)果的判斷標準為示值穩(wěn)定性(A)±0.005;波長示值誤差(nm)±3;波長重復性(nm)±1.5;吸光度示值誤差(A)±0.03;吸光度重復性(%)≤1.0;靈敏度(L/mg)≥0.006;通道差異(A)≤0.03(單通道酶標儀無此項要求);線性±2.0%。

　　酶標儀檢定對使用的設(shè)備、材料等都有具體而嚴格的要求，保證檢定結(jié)果的準確可信。酶標儀檢定工作的主要條件是實驗室必須具備一臺經(jīng)計量部門檢定達I級合格的分光光度計，且附件配有完好的光譜中性濾光片，這對吸光度的誤差檢定非常重要，因為分光光度計和酶標儀比色角度的不同，只能通過光譜中性濾光片檢定吸光度誤差。

　　酶標儀的自檢是對儀器性能狀態(tài)的評價，也為儀器的維護、維修及配件的更換提供依據(jù)，是實驗室質(zhì)量保證的基礎(chǔ)，具有性能優(yōu)良分光光度計的臨床實驗室可進行酶標儀的自檢。