各種型號(hào)的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),就其基本結(jié)構(gòu)來(lái)說(shuō),都是由5個(gè)部分組成,即光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器和信號(hào)指示系統(tǒng)。
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)光源的基本要求是應(yīng)在儀器操作所需的光譜區(qū)域內(nèi)能夠發(fā)射連續(xù)輻射,有足夠的輻射強(qiáng)度和良好的穩(wěn)定性,而且輻射能量隨波長(zhǎng)的變化應(yīng)盡可能小。分光光度計(jì)中常用的光源有熱輻射光源和氣體放電光源兩類。熱輻射光源用于可見(jiàn)光區(qū),如鎢絲燈和鹵鎢燈;氣體放電光源用于紫外光區(qū),如氫燈和氘燈。

鎢燈和碘鎢燈可使用的范圍在340~2500nm。這類光源的輻射能量與施加的外加電壓有關(guān),在可見(jiàn)光區(qū),輻射的能量與工作電壓的4次方成正比。光電流也與燈絲電壓的n次方(n>1)成正比。因此必須嚴(yán)格控制燈絲電壓,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)必須備有穩(wěn)壓裝置。
在近紫外區(qū)測(cè)定時(shí)常用氫燈和氘燈。它們可在160~375nm范圍內(nèi)產(chǎn)生連續(xù)光源。氘燈的燈管內(nèi)充有氫的同位素氘,它是紫外光區(qū)應(yīng)用Z廣泛的一種光源,其光譜分布與氫燈類似,但光強(qiáng)度比相同功率的氫燈要大3~5倍。
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)單色器的作用是將來(lái)自光源的含有各種波長(zhǎng)的復(fù)合光按波長(zhǎng)順序色散,并從中分離出所需波長(zhǎng)的單色光。單色器由狹縫、準(zhǔn)直鏡及色散元件等組成。來(lái)自光源并聚焦于進(jìn)光狹縫的光,經(jīng)過(guò)準(zhǔn)直鏡變成平行光、投射于色散元件。色散元件使各種不同波長(zhǎng)的平行光有不同的投射方向(或偏轉(zhuǎn)角度)行程按波長(zhǎng)順序排列的光譜。再經(jīng)過(guò)準(zhǔn)直鏡將色散后的平行光聚焦于出光狹縫上。轉(zhuǎn)動(dòng)色散元件的方位,可使所需波長(zhǎng)的單色光從出光狹縫分出。
1、色散元件
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)常用的色散元件有棱鏡和光柵。早期紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)多采用棱鏡,現(xiàn)在多使用光柵。
棱鏡有玻璃和石英兩種材料。它們的色散原理是依據(jù)不同波長(zhǎng)光通過(guò)棱鏡時(shí)有不同的折射率而將不同波長(zhǎng)的光分開。由于玻璃可吸收紫外光,所以玻璃棱鏡只能用于350~3200nm長(zhǎng)范圍。石英棱鏡可適用的波長(zhǎng)范圍較寬,大致為185~4000nm,可用于紫外、可見(jiàn)、近紅外三個(gè)光域。
光柵是利用逛的衍射與干涉原理制成的。它可用于紫外、可見(jiàn)及近紅外光域,而且在整個(gè)波長(zhǎng)區(qū)具有良好的、幾乎均勻一致的分辨能力。它具有色散波長(zhǎng)范圍寬、分辨本領(lǐng)高、成本低、便于保存和易于制備等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)是各級(jí)光譜重疊面會(huì)產(chǎn)生干擾。
2、準(zhǔn)直鏡
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)準(zhǔn)直鏡是以狹縫為焦點(diǎn)的聚焦鏡。其作用是將進(jìn)入色散器的發(fā)散光變成平行光,將色散后的單色平行光聚集于出光狹縫。
3、狹縫
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)狹縫為光的進(jìn)出口,包括入射狹縫和出射狹縫。進(jìn)光狹縫起著限制雜散光進(jìn)入的作用。狹縫寬度直接影響分光質(zhì)量。狹縫過(guò)寬,單色光不純,將使吸光度改變;狹縫太窄,則光通量小,將降低靈敏度。故測(cè)定時(shí)狹縫寬度要適當(dāng),一般以減小狹縫寬度至溶液的吸光度不再增加為宜。
一般廉價(jià)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)多用固定寬度的狹縫,不能調(diào)節(jié)。精密紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)狹縫可調(diào)節(jié)。光柵分光的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)多用單色光的譜帶寬度,直接表達(dá)單色光的純度。棱鏡分光的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)因色散不均勻,只能用狹縫的實(shí)際寬度(一般為1~3mm)表示,單色光的譜帶寬度(即單色光的純度)需經(jīng)換算后才能得到。
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)吸收池(比色皿)用于盛放分析樣品,一般有石英和玻璃材料兩種。石英池適用于可見(jiàn)光區(qū)及紫外光區(qū),玻璃吸收池只能用于可見(jiàn)光區(qū)。為減少光的反射損失,吸收池的光學(xué)面必須完全垂直于光束方向。吸收池要挑選配對(duì),吸收池材料的本身吸光特征以及吸收池的光程長(zhǎng)度的精度等對(duì)分析結(jié)果都有影響。
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)器的功能是檢測(cè)光信號(hào)、測(cè)量單色光透過(guò)溶液后光強(qiáng)度變化的一種裝置。對(duì)檢測(cè)器的要求是:在測(cè)定的光譜范圍內(nèi)具有高的靈敏度;對(duì)輻射能量的響應(yīng)時(shí)間短,線性關(guān)系好;對(duì)不同波長(zhǎng)的輻射相應(yīng)均相同,且可靠;噪聲水平低,穩(wěn)定性好等。常用的檢測(cè)器有硒光電池、光電管和光電倍增管等。它們通過(guò)光電效應(yīng)將照射到檢測(cè)器上的光信號(hào)轉(zhuǎn)變成電信號(hào)。
1、硒光電池
硒光電池對(duì)光的敏度范圍為300~800nm,其中又以500~600nmZ為靈敏。這種光電池的特點(diǎn)是能產(chǎn)生可直接推動(dòng)微安表或檢流計(jì)的光電流,缺點(diǎn)是受強(qiáng)光照射或長(zhǎng)久連續(xù)使用時(shí)會(huì)出現(xiàn)疲勞現(xiàn)象,表現(xiàn)為光電流逐漸下降。這時(shí)應(yīng)停止使用,將它放置暗處使其恢復(fù)原有的靈敏度,嚴(yán)重時(shí)要更換新的硒光電池。

2、光電管
光電管在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上應(yīng)用較為廣泛。它的結(jié)構(gòu)是以一彎成半圓柱形的金屬片為陰極,陰極的內(nèi)表面涂有光敏層;在圓柱形的ZX置以金屬絲為陽(yáng)極,接受陰極釋放出的電子。兩電極密封于玻璃或石英管內(nèi)并抽成真空。陰極上光敏材料不同,光譜的靈敏區(qū)也不同??煞譃樗{(lán)敏和紅敏兩種光電管,前者是在鎳陰極表面上沉積銻和銫,在210~625nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)均可用;后者是在陰極表面上沉積了銀和氧化銫,適用范圍為625~1000nm。與光電池比較,它有靈敏度高、光敏范圍寬、不易疲勞等優(yōu)點(diǎn)。
3、光電倍增管
光電倍增管是檢測(cè)微弱光Z常用的光電元件,它的靈敏度比一般的光電管要高200倍,因此可使用較窄的單色器狹縫,從而對(duì)光譜的精細(xì)結(jié)構(gòu)有較好的分辨能力。
它的作用是放大信號(hào)并以適當(dāng)方式指示或記錄下來(lái)。常用的信號(hào)指示裝置有直讀檢流計(jì)、電位調(diào)節(jié)指零裝置以及數(shù)字顯示或自動(dòng)記錄裝置等。很多型號(hào)的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)裝配有微處理機(jī),一方面可對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行操作控制,另一方面可進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
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